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        常見實驗問題

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        1. Mmol/l的換算關系?

        Mmol/l,mMmmol/l,μMμmol/l,nMnmol/l,pMpmol/l,fMfmol/l。

        1M=103mM=106μM=109nM=1012pM=1015fM

        2.?實驗操作中常說的室溫究竟是多少溫度?

        生物學實驗中的室溫通常20-25,而不是實際的室內溫度。

        3.?離心力(×g)和每分鐘轉速(rpm)如何換算?

        轉速有離心(×g)和每分鐘轉速(rpm)兩種表示方式,有些離心機設置有rpmxg顯示,但普通離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算:

        g=r×11.18×10-6×rpm2 (r?為有效離心半徑,即從離心機軸心到樣品中心位置的長度,單位為厘米)

        :?轉速為3000rpm,有效離心半徑為10 cm,則離心力為=10×11.18×10-6×30002=1006.2(×g)。

        4.?凍存試劑或樣品可以室溫或37水浴解凍嗎?

        凍存試劑或樣品的解凍,如果時間比較充裕,建議在冰浴或冰水浴上緩慢解凍。如果時間比較著急,大多數凍存的試劑或樣品是可以在室溫37水浴解凍,但都必須特別小心,必須邊觀察、邊輕輕晃動、邊融解。待部分溶解后即需從水浴中取出,確保溶解過程中試劑或樣品還是接近0的。如果該試劑或樣品在0不會結凍,解凍后可以置于冰浴或冰水浴。

        5.?微量液體試劑如何量???

        (1)在開啟裝有微量試劑的離心管之前,宜先適當離心(500-2000rpm離心5秒即可)。這一步很重要,目的是將因運輸顛倒而粘于管壁和蓋子上的試劑收集至管底以供使用。

        (2)微量液體樣品宜盡量減少量取次數,以減少不必要的損耗。每多量取一次會損耗0.5-數微升不等的試劑,例如總體積為100μl的試劑,每次量取5μl,通常不太可能量取20次的。

        (3)事先計算好樣本數量和試劑使用量,一次性量取配制出一定量的工作液后,再分裝至各反應管之中。這樣可以減少試劑量取的次數。

        (4)最好使用經校驗的、精密度高、合適量程的微管移液槍及槍頭,否則會有超乎想像的誤差和損耗。如果是連續量取,每次量取都宜更換槍頭,否則會導致第一次吸取后每次的吸取體積明顯偏大。

        (5)移液槍吸取操作時,宜垂直進入液面數毫米。槍頭通常不宜直接插入管底,略低于液面即可,避免試劑過多粘于槍頭造成損耗。慢吸,緩慢松開控制按鈕,否則液體進入吸頭過速會導致少量液體倒吸入移液器內部,導致最終打出時的體積減少。

        (6)打出液體時槍頭貼壁并有一定角度,慢放,即緩慢打出液體。

        6.?對于微量粉末試劑如何操作及使用?

        (1)在開啟裝有微量試劑的離心管之前,宜先適當離心(500-2000rpm離心5秒即可)。這一步很重要,目的是將因運輸顛倒而粘于管壁和蓋子上的試劑收集至管底以供使用。

        (2)對于10mg或以下的微量固體樣品,通常不建議再使用天平進行稱量,而宜直接按照產品標簽上標示的量進行溶液的配制。例如5mg的粉末試劑,很多時候很難從離心管中全部取出來的,但可以在該離心管內全部配制成適當的溶液。對于量略多一些的微量粉末樣品,也宜盡量減少稱量次數,通常建議每次稱量的重量不少于10mg。多次微量的稱量可能會由于稱量誤差導致每次的檢測結果產生偏差。對于微量的粉末,如果不涉及溶液保存的穩定性方面的問題,通常建議一次性將所有的粉末試劑按標注的劑量配制完畢。

        (3)如果需要稱量,請注意使用靈敏度較高的分析天平,使用前進行校準。另外,稱量時不建議帶乳膠手套(可以戴一次性薄膜手套),以防止乳膠手套和稱量紙之間產生的靜電影響稱量的準確性。稱量20-30mg或更小重量時,不可以戴乳膠手套。我們測試過的多種乳膠手套(包括某些品牌的進口乳膠手套),在用乳膠手套接觸(摩擦)稱量紙后會產生靜電,從而會影響稱量的準確性,誤差可以達到數毫克。而使用聚乙烯材質的薄膜手套,即所謂的PE薄膜手套(類似于保鮮膜材質),接觸稱量紙則不會產生靜電,此時誤差較小。

        7.?試劑或試劑盒存放時搞錯保存溫度,是否會影響其使用效果或是否能繼續使用?

        對于很多試劑雖然要求低溫保存,但這是長期保存的條件,很多時候是完全可以4甚至室溫短時間保存的。對于具體的某種試劑或試劑盒是否可以繼續使用,請設置標準品或陽性對照進行檢測,如果標準品或陽性對照的檢測結果正常即可繼續使用。

        8.?試劑已經變色是否還能用?

        不能用。試劑變色通常由于試劑的不穩定引起,變色很多時候表明試劑已經變質。對于需要低溫或避光保存的試劑一定要低溫或避光保存。



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        2020年4月3日 10:25
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